摘要：熊果酸高含量為有光澤的棱柱狀（無水乙醇）或細毛樣針狀結晶（稀乙醇），低含量為棕黃色或黃綠色粉末，具特殊的氣味，是存在于天然植物中的一種五環三萜類化合物。

      目的為控制樂山梔子的質量，建立高效液相色譜法測定樂山梔子中熊果酸含量的方法。方法采用高效液相色譜法，以熊果酸為化學對照品，固定相：UltimateTMC18鍵合硅膠柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相：甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06），流速0.6ml·min-1，溫度25℃，波長210nm測定樂山梔子熊果酸含量。結果熊果酸在0.1～3.0μg范圍內峰面積A與其質量M呈現良好的線性關系，其回歸方程為：A＝－12954.8829＋452850.9603M，r＝0.9996，n＝7；3批樂山梔子中熊果酸的含量分別為（0.2555±0.0016）mg·g-1藥材，RSD＝0.6221%，n＝4；（0.265825±0.003491）mg·g-1藥材，RSD＝1.313%，n＝4；（0.258875±0.006198）mg·g-1藥材，RSD＝2.394%，n＝4；精密度實驗RSD＝1.754%，儀器精密度良好；穩定性實驗RSD＝3.493%，在3.5h測定熊果酸的含量是穩定的；重現性實驗RSD＝0.9051%，平均回收率101.9%。結論高效液相色譜法適合樂山梔子中熊果酸的含量測定，該方法操作簡便，結果穩定，精密度、重現性、回收率較好，值得推廣。

      梔子為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實，主產于浙江、四川、江西、重慶、湖北等省。梔子具有瀉火除煩、清熱、涼血解毒之功效，用于熱病心煩、黃疸、尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡癰等證。根據現代藥理研究證實，熊果酸為梔子重要有效成分，具有顯著而迅速降低谷丙轉氨酶，消退黃疸，增進食欲和恢復肝功能的作用，這在茵梔黃注射液、茵陳蒿湯等方劑中得到廣泛的應用。梔子治療急性黃疸型肝炎、病毒性肝炎主要是通過其有效成分熊果酸實現的，熊果酸是梔子利膽退黃、抗病毒性肝炎的主要有效成分。梔子熊果酸還具有解熱降溫、抗炎、抗腫瘤等活性。有報道表明，梔子苷的生理活性有限，其利膽作用、保護肝損傷、降低轉氨酶方面均不及梔子中熊果酸明顯，而且梔子苷分子中雙鍵性質活潑，不穩定，易發生反應。相比而言，梔子熊果酸受熱更穩定，因此控制梔子熊果酸含量具有非常重要的質量評價意義［1～6］。本研究通過高效液相色譜法測定樂山梔子熊果酸含量，為建立樂山梔子質量新標準提供參考。

      1儀器與材料SSI高效液相色譜儀；UltimateTMC18鍵合硅膠柱（4.6mm×250mm，5μm）；AS3120AUltrasonicCleaner；AP-01P真空泵；HaierBCD-176DA電冰箱；SHHV21型長風三用電熱恒溫水浴箱；ZK072型電熱真空干燥箱；RE-52B型旋轉蒸發器；AS701KDTUltrasonicCleaner；UV-9200型紫外可見光分光光度計；FA1104W電子天平；Sh10A型水份快速測定儀；50目分樣篩；KodakEasyshareZ7590數位相機；CASIOfx-4800p電子計算器；冰醋酸、甲醇、三乙胺為分析純，色譜純甲醇；熊果酸化學對照品（110742-200516，約20mg，供含量測定用）（中國藥品生物制品檢定所）、梔子產自四川樂山（經課題組鑒定為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實）。

      2方法與結果2.1色譜條件固定相：UltimateTMC18鍵合硅膠柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06）；流速0.6ml·min-1；溫度25℃；波長210nm［7］。

      2.2梔子熊果酸提取條件優選以藥材粒徑、甲醇加入量、超聲提取時間、超聲提取次數4因素3水平，以熊果酸收率為指標，選用L9（34）正交表優選梔子熊果酸提取條件為：梔子藥材粉碎為50目粉末，加入甲醇量為藥材量的5倍，每次超聲提取60min，超聲提取3次，可使熊果酸收得率達到最大，且經濟合理，將另文報道。

      2.3熊果酸標準曲線繪制［8］精密稱取熊果酸化學對照品2.0mg（60℃減壓干燥24h），用無水甲醇定容于10ml容量瓶中，即得0.2mg·ml-1的熊果酸對照品溶液。熊果酸在0.1～3.0μg范圍內峰面積A與其質量M呈現良好的線性關系，其回歸方程為：A＝－12954.8829＋452850.9603M，r＝0.9996，n＝7。

      2.4精密度實驗精密吸取上述熊果酸對照品溶液10μl，其積分面積RSD＝1.754%，n＝5，表明該方法、該儀器測定熊果酸精密度符合要求。

      2.5穩定性實驗精密吸取上述熊果酸對照品溶液10μl，每隔30min測定1次，其積分面積RSD＝3.493%，n＝5。表明熊果酸用該方法在該儀器上3.5h內測定結果較穩定，符合要求。

      2.6梔子熊果酸含量測定重現性實驗照前面“2.2”項梔子熊果酸的提取工藝，測得梔子熊果酸含量RSD＝0.9051%，表明該方法重現性實驗符合要求。

      2.7梔子熊果酸加樣回收率實驗照前面“2.2”項梔子熊果酸的提取工藝提取，取該溶液2ml，加入上述熊果酸對照品溶液0.3ml，平均加樣回收率為101.9%，表明該方法測定梔子熊果酸的加樣回收率符合要求。

      2.83批樂山梔子熊果酸含量測定按照“2.2”項的提取條件提取3批樂山梔子熊果酸，按照上述測定條件分別測定熊果酸含量，測定結果見表1［9］。

      3討論經過采集樂山、云南、貴州、湖南、河南等地的梔子并測定熊果酸含量，發現樂山梔子含量最高，證實其確為質量優良的正宗川梔子。

      實驗發現，上述熊果酸對照品溶液積分面積為1.5×105～2.5×105，峰高為6×103～7×103，理論塔板數約1.2×104時，峰高法計算結果與真實值的誤差為1.240%，積分面積計算結果與真實值的誤差為1.415%，表明峰高法比積分面積法更接近真實值，尤其適用于熊果酸峰與齊墩果酸及其衍生物峰未完全分開時?？紤]到樂山梔子中熊果酸峰與齊墩果酸及其衍生物峰完全分開，而且峰高法計算結果與峰面積法計算結果無顯著性差異，出于習慣考慮，本文仍采用峰面積法測定樂山梔子熊果酸的含量。表1樂山梔子熊果酸含量（略）

      冰醋酸主要用于改善熊果酸與齊墩果酸及其衍生物圖譜分離度，由于冰醋酸具有揮發性，對熊果酸與齊墩果酸及其衍生物圖譜分離度存在一定程度的波動，通過反復實驗，才得到較成功的圖譜。若改用不具有揮發性的磷酸，則能改善熊果酸與齊墩果酸及其衍生物圖譜分離度的波動性，可能更容易成功，有待于進一步研究。

      熊果酸提取溫度最好在60℃以下，樣品溶液置于0℃冰箱中貯存，測定時分析室的溫度控制在25℃左右，以避免熊果酸分解對結果造成影響。