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現在，多功能酶標儀基本上是每個生物學實驗室必備的基礎科研設備。市場上多功能酶標儀品牌主要有Bio-Tek、BMG、MD、PE、Tecan等。每個品牌都有自己的特色和優勢產品。而各品牌廠家在對自己產品性能－比如說檢測靈敏度的描述時，除了表征光吸收值的OD值參數外，像熒光檢測靈敏度、發光檢測靈敏度等，卻往往沒有一個統一的方式和定義（名稱等）。這對用戶在選購酶標儀時進行儀器間性能的對比會帶來一定的困惑。我們來看看市場上的優勢品牌在對熒光檢測靈敏度這一參數的不同的描述： |
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表1: |
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從上表1可看出，對于靈敏度的描述，主要有“Sensitivity”和“Detection Limit”兩種說法,我們分別來看它們的定義： A: Detection Limit： 檢出限，這里有兩種理解：分析方法檢出限和儀器檢出限 |
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1.分析方法的檢出限：國際理論與應用化學聯合會（IUPAC）對檢出限的規定：對各種光學分析方法，可測量的最小分析信號XL以下式表示：
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2.儀器檢出限：用于評價儀器的檢測能量，即：相對應背景，儀器可靠檢測的最小信號，通常用信噪比S/N來表示，為S/N≥K,根據置信度概念，K可取2或3，為合理的賦予值。
B: Sensitivity：靈敏度。對于靈敏度概念而言，在IUPAC的定義是：方法的靈敏度m表示被測組分濃度或含量改變一個單位時所引起的分析信號的變化，即m=dX/dc。其中X為分析信號，c為濃度或含量。在分析方法的校正曲線上，一般可以認為靈敏度就是分析校正曲線的斜率。曲線斜率越大，表示靈敏度越高。但在儀器參數中所說的“Sensitivity”并不是表示這一概念，而是具體指的是“DL（Detection Limit）或LOD（Limit Of Detection）”，比如BMG在Sensitivity的注解中就明確說明指的是“LOD”。如果上述（表中）參數描述的“Detection Limit”（Tecan/MD/PE）指的是“方法檢出限”且“Sensitivity”(BMG/Bio-Tek/Thermo)指的是“LOD”時，則Sensitivity＝LOD＝DL＝Detection Limit。雖然描述詞不同，但是概念是相同的，其參數可以直接比較。 |
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目前從各廠家官方公開的資料中，只有BMG明確說明采用國際理論與應用化學聯合會（IUPAC）的檢測標準去例明參數。也只有BMG公司在參數中明確寫明了其Sensitivity的定義，包括定義、詳細的測定條件等。例如在BMG最新推遲的高性能漸變濾片型光柵多功能酶標儀CLARIOstar的參數描述中，其FI（熒光）頂讀的靈敏度為FI Filters (top) < 0.4 pM (< 8 amol/well Fluorescein, 384sv, 20 μL)，就在參數后面明確寫明了測試靈敏度時的方法：采用熒光素（Fluorescein）為底物做6點的標準曲線，采用的是384 Small Volume微孔板，20μL的檢測體系。這里要清楚知道，測定參數時采用的微孔板類型以及檢測體系的體積非常重要。因為不同的條件，其靈敏度計算結果是不一樣的。下面表2為各酶標儀廠家的官方網站的參數資料： |
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表2: |
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從表2中可以看出，每個廠家都有不同的標準去定出其檢測靈敏度。一般會把所用的檢測濃度和質量寫出來，但也有些廠家或型號只例出濃度單位，例如：Bio-Tek Neo，MD SpectraMax M5/M3等。要全面比較檢測靈敏度，其實要配合濃度、質量和檢測體積幾個要數作考慮。如果只有濃度(M)，那實際檢測的體積是多少?200μl?100μl或是20μl?不同的體積會使實際檢測的質量不同，這可以是十倍或更多的差別。
除此之外，統一性的檢測標準也很重要。例如：BMG所有型號的頂讀熒光每次都會用384 small volume微孔板，并以20μl的體積進行檢測。從表2中可以看到由中端研究型的FLUOstar Omega到最高端的PHERAstar FS都是用統一的檢測標準去量度和顯示其靈敏度。如果型號間的檢測標準不一，如Tecan入門型號F200和高端型號F500的參數，前者是用100μl做出的；后者是用10μl做出的。這樣用戶會發現一個有趣現象 – 就是單看濃度，F200（0.85pM）入門型好像比F500（1pM）高端型號更靈敏！當然用戶也會有疑問，為什么較低端F200比高端的F500要多用10倍體積？大家同樣是384孔板，為什么檢測的體積標準不一樣呢？那是否那100μl做出來的參數用20μl時可以做出同樣的靈敏度(85 amol)？這相信值得用家去思考一下。 BMG的所有參數是根據IUPAC標準去檢測出來，所用的方法、體積、微孔板、濃度和質量等，都清楚例明。在384孔板中一貫采用20μl體積是因為這是最接近實際實驗的情況。有些廠家所用的檢測體積與現實情況其實有差距，例如Biotek的Synergy 2熒光參數標示為：“Fluorescein 1 pM typical (0.1 fmol/well 384-well plate) – Top”，雖然廠家沒有寫出來，但只要小心計算，可得出384孔板時的參數是用100μl的體積去做檢測。實際上，市場上的384孔板的每孔體積一般只有約110μl (例如：CORNING)，而微孔板廠家推薦使用體積為20μl -80μl。如果用100μl去做檢測是有點不太現實，因為體積太滿會令孔內液體在檢測移動過程中比較容易淺出，這也使孔板在實驗過程中無法使用振動功能去搖勻孔內的樣本，影響檢測結果。再者，使用384孔板的原因除了因為高通量外，更重要的是想用更小的樣本和試劑體積。如果在384孔板上要用到100μl的試劑樣本，那跟原來想節省成本的原意就背道而馳了。當然，檢測體積愈小，對儀器的檢測靈敏度要求愈高，對廠家挑戰也愈大。但BMG寧可放棄用較大體積做出來的漂亮參數，也要忠于實際操作，用小體積做出參數給客戶參考。事實上，即使是BMG最入門的Optima系列的化學發光和熒光酶標儀，也被客戶用來發表了超過110份Nature或Nature Publishing Group的文章，其優良的性能實際是不容懷疑。 綜合以上各方面，在對酶標儀的參數進行對比時，單位的統一非常重要，同時測定參數時采用的條件同樣重要。對于眾多廠家的儀器，其實很難用一個完全一樣的方法去比較，因為不同廠家所用的條件都不一樣。畢竟儀器的性能和表現是要用家使用出來，而不只是靠把參數寫得漂亮。 |
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