如何解決色譜柱使用過程出現的問題
問題:
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質溶解
強保留組分堆積堵塞
表現:
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，柱效(N)
問題:
柱外效應
原因:
系統差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。
表現:
柱效（N)
問題:
分離效果變差
原因:
流動相組分改變
流速改變
溫度改變
表現:
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，分離因子（α）
保留因子(k)，柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時間不夠
柱超載 樣品量太大
表現:
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；
2．柱頭有污染；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應；
6．化學或二次保留（硅羥基）效應；
7． 緩沖容量不足或不合適；
8． 重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問題
A. 與化學有關的拖尾問題
1．流動相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進樣量至<1μg。
B. 與色譜柱有關的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；
2.使用保護柱。
C. 與HPLC系統有關的峰拖尾和峰加寬
1.進樣體積過大，（通常≤25μL）；
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（最佳連接管應<20cm，內徑為0.007"）；
3.檢測器流通池的體積過大。
問題:
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質溶解
強保留組分堆積堵塞
表現:
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，柱效(N)
問題:
柱外效應
原因:
系統差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。
表現:
柱效（N)
問題:
分離效果變差
原因:
流動相組分改變
流速改變
溫度改變
表現:
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，分離因子（α）
保留因子(k)，柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時間不夠
柱超載 樣品量太大
表現:
保留因子(k)，柱效變化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；
2．柱頭有污染；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應；
6．化學或二次保留（硅羥基）效應；
7． 緩沖容量不足或不合適；
8． 重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問題
A. 與化學有關的拖尾問題
1．流動相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進樣量至<1μg。
B. 與色譜柱有關的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；
2.使用保護柱。
C. 與HPLC系統有關的峰拖尾和峰加寬
1.進樣體積過大，（通常≤25μL）；
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（最佳連接管應<20cm，內徑為0.007"）；
3.檢測器流通池的體積過大。
