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基于UNIFI的沃特世生物制藥系統解決方案的一項基本功能

   2011-01-05 沃特世科技(上海)有限公司(Waters)1006

目的
展示UNIFI™ 科學信息系統的強大功能如何幫助用戶查看和審核UPLC®/MS或UPLC/MSE肽圖分析實驗獲得的LC/MS原始數據。

背景
肽圖分析是藥物蛋白鑒定的基本工具,可監測蛋白藥物結構新變體,并對已知變體的變化程度進行監測。利用高分辨質譜檢測進行肽圖分析可得到非常豐富的蛋白藥物數據信息,從中獲得關鍵數據結果是非常有挑戰性的。

專為UPLC/MS肽圖分析設計的軟件工作流程,如基于MassLynx™ 軟件的BiopharmaLynx™和基于UNIFI的沃特世生物制藥系統解決方案中的UPLC/MS肽圖流程,可大大縮短數據處理時間,且不需要人工查看數據組。

然而,分析工作者在得到軟件處理后的數據結果后,還往往需要重新查看色譜、質譜的原始數據,以便對重要的數據結果進行驗證,有時這也是實驗室SOPs的要求。UNIFI科學信息系可滿足管理生物制藥工作流程的需要,具有更強大的功能來支持用戶的驗證流程。

解決方案
采集蛋白質烯醇酶I(來自S. cerevisiae)的UPLC/MSE肽圖數據(120分鐘,梯度洗脫)。利用UNIFI UPLC/MS肽圖工作流程進行數據處理,利用典型參數設置(<10 ppm質量精度,胰蛋白酶、半胰蛋白酶及單一錯切偏差多肽歸屬,可能產生天冬酰胺脫酰氨基作用和蛋氨酸氧化)。

前頁的圖-1是處理后的肽圖結果,在UNIFI Review功能選項中該數據組以截屏圖像的形式顯示出來。Review選項可提供主要數據表和不同圖形顯示窗口之間處理結果的互動導航。圖中,T6胰酶水解肽段在色譜圖窗口中在基峰強度(BPI)圖譜中突出顯示(保留時間約 54.75 min)出來,相關的MSE質譜數據再Fragment Viewer窗口顯示。可利用該信息及表格結果迅速確定所產生的自動峰歸屬是否正確。

對于一些意料之外的結果,用戶可進一步挖掘原始數據,以驗證得到的定量和定性分析結果。打開Investigate功能選項卡(見前頁圖-2)即可出現直接由UPLC/MS原始數據產生的色譜和質譜結果的圖形和表格顯示區。這些視圖還支持用戶進行開放式研究,如:提取某些特定質量的峰、譜圖加和、運用背景校正等。反之,可通過處理后的某個峰來分析其對應的原始數據。為使該圖簡單化,選定相同的T6肽段進行更進一步研究。

n 圖2中的三維圖形瀏覽工具(左上、二維視圖、2+離子智能變焦)表明這個峰的質譜數據中沒有任何干擾,并突出顯示了2+離子的同位素峰檢測結果。

n 更為重要的是,T6相關的提取離子色譜圖(左下)、加和圖譜(右上、右中)和處理后的質譜鑒定數據(右下)都可通過使用與組成窗口有關的可選擇命令自動生成(圖-3)。n 對UPLC/MS原始數據中的各個峰進行分析的功能不僅可縮短用戶查看其它圖譜進行結果驗證的時間,還可將實驗室進行肽圖分析的過程標準化。

總結
科學家能夠在處理后的數據下面自由進行原始數據的查看和再處理是對復雜生物藥物UPLC/MS數據分析應用軟件的基本要求。UNIFI科學信息系統的功能遠遠超過這個基本要求,它利用肽圖分析中檢測到的肽段數據,自動產生有意義的色譜和質譜原始數據的視圖。這個平臺簡化了結果的驗證過程、將實驗室操作流程標準化,縮短了從數據采集到產品決策的時間。

 
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