為了達(dá)到最佳靈活性和靈敏度，我們提供5X和10X濃度的naica® multiplex PCR MIX以降低MIX用量，從而使得更多的反應(yīng)體積可供更多的模板、引物或探針的加入。
 

naica® multiplex PCR MIX可在naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行同時(shí)定量，并保持良好線性。

采用0.2到13000cp/uL的DNA樣本，使用10X naica® multiplex PCR MIX，在naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上進(jìn)行三個(gè)靶點(diǎn)的同時(shí)檢測(cè)（圖1）。高濃度的PCR MIX（5倍和10倍濃度均可使用）可使樣本輸入體積最大化，從而提高低濃度樣本中目標(biāo)靶點(diǎn)的檢測(cè)能力。

▲ 圖1：使用naica® multiplex PCR MIX同時(shí)對(duì)3個(gè)靶點(diǎn)（BRAF、ALB和pUC18）進(jìn)行線性定量。將人類基因組(hg)DNA和pUC18質(zhì)粒進(jìn)行連續(xù)稀釋（0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000cp/uL），各稀釋液進(jìn)行3次重復(fù)檢測(cè)。結(jié)果顯示各靶點(diǎn)的線性關(guān)系好，R2均大于0.99，說明結(jié)果高度真實(shí)可靠。

在多重檢測(cè)中可以對(duì)低濃度靶點(diǎn)進(jìn)行穩(wěn)定且靈敏的檢測(cè)。

多重檢測(cè)中多個(gè)靶點(diǎn)的共擴(kuò)增比單個(gè)靶點(diǎn)的擴(kuò)增更為復(fù)雜，可能會(huì)因?yàn)闈撛诘母蓴_和反應(yīng)復(fù)雜性的影響，導(dǎo)致多重檢測(cè)的線性范圍降低。在naica®微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上使用naica® multiplex PCR MIX分別進(jìn)行3重和單重檢測(cè)（圖2），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不管是在高濃度的外部靶點(diǎn)（BRAF和ALB hgDNA）存在的情況下（圖2A）還是在外部靶點(diǎn)不存在的情況下（圖2B），兩組實(shí)驗(yàn)中pUC18線性量化的動(dòng)態(tài)范圍一致，且陽(yáng)性微滴和陰性微滴群組的熒光水平和可分性也高度一致。此外，不管是單重還是3重檢測(cè)，pUC18靶點(diǎn)都能得到可靠的定量（圖3），且檢測(cè)范圍和線性度一致。

▲ 圖2：使用naica® multiplex PCR MIX進(jìn)行的3重和單重?cái)U(kuò)增的比較。將pUC18質(zhì)粒的13000至0.2 cp/uL的系列稀釋液在2個(gè)外部擴(kuò)增靶點(diǎn)背景下(每個(gè)靶標(biāo)為3000cp/uL,圖A))和在不含外部靶點(diǎn)(圖B)的情況下進(jìn)行定量檢測(cè),3次重復(fù)。結(jié)果顯示，3重和單重?cái)U(kuò)增中pUC18的檢測(cè)結(jié)果高度一致。注：3重和單重的反應(yīng)液中均含有pUC18、BRAF和ALB的特異性引物探針。

▲圖3：使用naica® multiplex PCR MIX的擴(kuò)增結(jié)果真實(shí)可靠。采用13000-0.2cp / uL的pUC18 DNA稀釋液進(jìn)行3重(A)和單重檢測(cè)(B)，各稀釋液進(jìn)行3次重復(fù)。(A) 3重反應(yīng)中額外加入3000cp / uL(10ng)的hgDNA模板；(B) 單重反應(yīng)中沒有額外加入hgDNA模板。結(jié)果顯示，3重和單重反應(yīng)中，pUC18均能獲得真實(shí)可靠的定量結(jié)果，同時(shí)檢測(cè)范圍和線性高度一致；3重反應(yīng)中BRAF和ALB檢測(cè)也具有良好的重復(fù)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.3-2.5%之間，n=21。