①超凈工作臺:
超凈工作臺的種類很多,有單面單人、單面雙人、雙面雙人或雙面四人等,其工作原理是利用鼓風機,使通過高效濾氣的空氣,徐徐通過臺面,這樣使工作環境中具無菌而均勻的空氣。
根據層流方式的不同,超凈工作臺主要分為水平層流式和垂直層流式兩種,基本原理大致相同,都是將室內空氣經粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器,由此送出的潔凈氣流從一定的均勻的斷面風速通過無菌,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。但兩種凈化臺的氣流方向不同。
使用超凈工作臺應注意的幾點問題:
A.凈化工作臺最好安裝在無塵的房間內,最好為隔離好的無菌間內,以免塵土過多易使濾器阻塞,降低凈化效果,縮短使用壽命。
B.新安裝的或長期未使用的工用臺,工作前必須對工作臺和周圍環境用真空吸塵器或不產生纖維的工具進行清潔工作,再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進行滅菌處理。
C.每次使用工作臺時,應先用75%酒精擦洗臺面,并提前以30~50min紫外線滅菌燈處理凈化工作區內積累的微生物。在關閉紫外燈后應啟動送風機使之運轉兩分鐘后再進行培養操作。
D.凈化工作區內不應存放不必要的物品,以保持潔凈氣流型不受干擾。
E.一般情況下,高效過濾器三年更換一次。更換高效濾器應請專業人員操作,以保持密封良好。要定期將粗過濾器中的過布(無紡布)拆下清洗,時間應根據環境潔凈程度而定,通常間隔3~6個月進行一次。
F.每次使用凈化臺要及時清除工作臺面上的物品,并用灑精擦洗臺面使之始終保持潔凈。
②4℃冰箱和低溫冰箱;
③CO2培養箱:
A.一定濃度的CO2對細胞生長,尤其是原代培養和單細胞培養有促進作用(5%)。
B.一定濃度的CO2可維持培養液恒定的pH。適用于開放培養,培養箱封口后,可在一般恒溫培養箱內培養,但是采用培養皿或多孔板培養時,則需要高濕度和高CO2含量的空氣。
C.它增加了濕度,箱體內裝有水浴,可以保證培養箱內的濕度。
D.培養箱內裝有紫外燈。
E.通過氣體流量計可以調節CO2和空氣的比例。
F.在水中可加入防腐劑(二氧乙酸)。可防止因CO2培養箱中濕度較高,易長霉菌。
④臭氧發生器;
④離心機;
⑤CO2鋼瓶;
⑥液氮罐;
⑦儲品柜:用來存放雜物;
⑧紫外燈;
⑨空氣凈化系統;
⑩倒置顯微鏡;
3.無菌操作
(1)無菌室的滅菌:
①紫外燈無人時就要打開;
②進無菌室要穿無菌服、戴帽子和口罩;
③每周清洗消毒一次;
④所用物品要以外科手術方式嚴格消毒;
⑤室內臺面要要保持潔凈,做完實驗后,用75%酒精或千分之三新潔爾滅棉球擦拭超凈工作臺的臺內、邊臺的臺面、倒置顯微鏡的載物臺等;
⑥所用物品要一次性準備好;
⑦瓶口要用酒精火焰消毒;
⑧盡量減少出入。
(2)實驗人員的無菌準備:
①肥皂洗手
②穿好隔離衣
③酒精棉球擦手
細胞培養室必備的設備有:
1. 超凈臺;
2. 二氧化碳培養箱;
3. 倒置顯微鏡;
4. 二氧化碳壓縮氣體;
5. 液氮罐;
6.低溫冰箱(-20度和-70度);
7. 過濾裝置;
8. 離心機;
9. 酶標儀等等。
試劑和小的工器具也很多,如:培養基、培養瓶、培養板、移液槍、酸缸、滴管、離心管、血球計數板、DMO、PBS、胰酶等等。
細胞培養室,最好選擇獨立房間,超凈臺應放置在比較潔凈的房間,如果條件允許,最好按潔凈廠房要求設計細胞培養室,即使房間做不到空氣過濾,也至少應是專用的,進出時要更換工作衣。