隨著醫(yī)療條件的進(jìn)步，潔凈技術(shù)在醫(yī)院的手術(shù)室和病房中得到的廣泛應(yīng)用，手術(shù)及術(shù)后的院內(nèi)感染發(fā)生率也得到了有效的控制，這離不開潔凈手術(shù)室和潔凈病房的貢獻(xiàn)。

醫(yī)院潔凈室的建立本身是基于控制空氣中懸浮粒子的目的，但除了要求控制環(huán)境中的粒子水平外，我們還要注重潔凈環(huán)境中的微生物污染水平。有研究表明，單一微生物本身并不能獨(dú)立存活在空氣當(dāng)中，他們要么以菌團(tuán)形式存在，要么附著于無活性的塵埃粒子之上。這也就將環(huán)境中微生物水平同懸浮粒子水平聯(lián)系在了一起。為了對潔凈室環(huán)境中的微生物進(jìn)行有效地控制并評(píng)價(jià)，應(yīng)進(jìn)行全面的取樣和監(jiān)控。目前，取樣方法可分為以下兩大類：

沉降菌平皿通常包含TSA或SDA，移去蓋子，平均放置于整個(gè)試驗(yàn)區(qū)域。暴露一段時(shí)間后，將沉降菌平皿關(guān)閉、培養(yǎng)。然后，對菌落數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)，標(biāo)識(shí)微生物。

使用沉降菌平皿的一個(gè)主要缺點(diǎn)是：沉降菌平皿暴露時(shí)，會(huì)因蒸發(fā)而失去水分，導(dǎo)致瓊脂表皮越來越干燥。這可能引起培養(yǎng)基上的某些微生物生長不良，從而低估這些微生物在空氣中的比例。同時(shí)，如果放置時(shí)間較短，微生物很難落到平皿上，這也在一定程度上使得沉降菌數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)意義降低了。

主動(dòng)取樣法可以捕獲定量體積空氣中的微生物粒子，能夠更加科學(xué)和量化的得知潔凈室空氣中微生物的污染狀態(tài)，這是其不同于沉降菌方法的優(yōu)勢所在。由于結(jié)果的量化性很高，使得同一潔凈室不同時(shí)間、甚至不同潔凈室之間的浮游菌檢測結(jié)果都可以進(jìn)行科學(xué)的比對。這使得浮游菌數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算更加有意義。

同樣，使用浮游菌檢測方法也有缺點(diǎn)：它只能反映一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的空氣微生物污染水平而不能得到一個(gè)時(shí)間段 ( 如整個(gè)手術(shù)過程 ) 的空氣污染情況。同時(shí)由于浮游菌檢測需要儀器設(shè)備，也就增加了引入污染的可能性，因此，對操作人員的要求也就更高，需要經(jīng)過更嚴(yán)格的培訓(xùn)才能夠有效避免引入污染的風(fēng)險(xiǎn)。

對于浮游菌的要求，如下表所示，GB50333《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范》和GB 15982《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》都明確給出了潔凈手術(shù)室的浮游菌（浮游法/空氣采樣器法）標(biāo)準(zhǔn)。這是我們進(jìn)行浮游菌檢測評(píng)判的重要依據(jù)。

表1 潔凈手術(shù)室的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（空態(tài)或靜態(tài)）

表2 各類環(huán)境空氣、物體表面菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

注：1.cfu/皿為平板暴露法，cfu/3為空氣采樣器法。

       2.平板暴露法檢測時(shí)的平板暴露法時(shí)間。

目前浮游菌檢驗(yàn)儀器所采用的方法主要有慣性直接撞擊法和離心撞擊法兩種，但無論基于哪一種方式，其核心都應(yīng)遵循ISO14698的要求，驗(yàn)證該設(shè)備的物理回收率和微生物回收率，是證明該浮游菌采樣器能夠采集到空氣中微生物的最直接證據(jù)。如果沒有 ISO14698的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，就無法證明該采樣器能夠得到科學(xué)有效的檢測數(shù)據(jù)和結(jié)果。同時(shí)， Feller校驗(yàn)以及培養(yǎng)基的選擇同樣會(huì)影響結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。

其中，ISO14698 《潔凈室和相關(guān)受控區(qū)域 - 生物污染的控制》明確給出了空氣采樣器的指導(dǎo)性要求，包含了以下兩方面需要對空氣采樣器進(jìn)行驗(yàn)證的內(nèi)容：

·物理回收率, 收集不同粒徑粒子的能力。

·生物回收率, 收集在瓊脂培養(yǎng)基上的微生物的恢復(fù)生長能力。

這兩個(gè)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的完成確保了空氣采樣器能夠有效收集并培養(yǎng)出定量空氣中微生物的能力，這是一臺(tái)空氣采樣器的核心所在，也是我們在采購空氣采樣器時(shí)需要重點(diǎn)評(píng)估的性能。

關(guān)于Feller 校驗(yàn)，其源于 1950 年，F(xiàn)eller, W 的一篇關(guān)于概率論及其應(yīng)用的論文。將其聯(lián)系到浮游菌檢驗(yàn)是基于如下假設(shè)：當(dāng)浮游菌采樣時(shí)，隨著空氣中浮游菌數(shù)量的增加，多個(gè)微生物通過同一個(gè)采樣孔撞擊到培養(yǎng)基表面并同時(shí)生長的概率也會(huì)增加。因此，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的微生物含量同平皿上得到的菌落數(shù)及采樣頭開孔數(shù)量的多少有關(guān)。開孔數(shù)量越多，則平皿上的菌落數(shù)越接近于實(shí)際空氣中的含菌量。最終的檢測結(jié)果和統(tǒng)計(jì)應(yīng)該使用校驗(yàn)后的數(shù)值。

在浮游菌采樣時(shí)，對于培養(yǎng)基的選擇是影響最終檢驗(yàn)結(jié)果的重要因素。從國際法規(guī)要求看，一般選用TSA（胰蛋白胨大豆瓊脂）和SDA（沙氏葡萄糖瓊脂），分別檢查總細(xì)菌數(shù)和總酵母與霉菌數(shù)。但是，潔凈室環(huán)境空氣中，經(jīng)常會(huì)殘存有消毒劑成分，這些殘留會(huì)對培養(yǎng)基表面捕獲的微生物的生長產(chǎn)生抑制作用，導(dǎo)致微生物生長速度的減緩甚至被殺滅，從而在正常培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)無法檢測到而導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)。因此，針對潔凈區(qū)內(nèi)使用的消毒劑的種類或生產(chǎn)品種的不同，需要選用添加了相應(yīng)中和劑和生物酶制劑的培養(yǎng)基來進(jìn)行日常檢驗(yàn)。