準(zhǔn)確測(cè)量光下最大熒光產(chǎn)額Fm’是植物葉片熒光參數(shù)測(cè)量的重點(diǎn)和難點(diǎn)。Fm’的測(cè)量不準(zhǔn)確將導(dǎo)致一系列相關(guān)熒光參數(shù)的錯(cuò)誤計(jì)算，如非光化學(xué)淬滅系數(shù)NPQ和葉肉導(dǎo)度gm等。
許多研究表明Fm’會(huì)隨“飽和閃光”強(qiáng)度的增加而增大。PSII具有快速周轉(zhuǎn)能力，傳統(tǒng)“飽和閃光”技術(shù)無(wú)法將PSII反應(yīng)中心受體側(cè)完全還原，因此容易造成對(duì)于光下最大熒光產(chǎn)額Fm’的低估。解決方案是首先測(cè)量多個(gè)不同“飽和閃光”梯度下的表觀AFm’， 進(jìn)而建立“飽和閃光”強(qiáng)度的倒數(shù)與它的線性方程關(guān)系，求算當(dāng)“飽和閃光”趨向于無(wú)窮大時(shí)對(duì)應(yīng)的熒光產(chǎn)額Fm’（文獻(xiàn)參考：Earl,H. And Ennahli, S. Estimating photosynthetic electron transport via chlorophyll fluorometry without Photosystem II light saturation. Photosynthesis Research, 2004,82 : 177~186.）。這種方法非常耗時(shí)，因此限制了其在實(shí)際測(cè)量中的應(yīng)用。
不僅如此，在運(yùn)用傳統(tǒng)“飽和閃光”技術(shù)測(cè)量時(shí)還需要假設(shè)過(guò)程速率常數(shù)（如kF, kD等）維持不變且沒(méi)有觸發(fā)副反應(yīng)，而很多研究表明上述假設(shè)在高強(qiáng)度“飽和閃光”下不成立。
針對(duì)傳統(tǒng)“飽和閃光”存在的這些不足，美國(guó)LI-COR公司的技術(shù)團(tuán)隊(duì)于2009年推出一項(xiàng)新技術(shù)Multiphase FlashTM，詳情請(qǐng)見(jiàn)：
Multiphase FlashTM多相閃光技術(shù)可以在一次短暫閃光過(guò)程中（～1s）快速測(cè)量多個(gè)閃光強(qiáng)度以及與之相對(duì)應(yīng)的熒光產(chǎn)額AFm’，通過(guò)線性擬合準(zhǔn)確推算EFm’。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：
（1）在不同“飽和閃光”強(qiáng)度下，通過(guò)Multiphase FlashTM方法推算得到的EFm’差異不顯著且總是高于傳統(tǒng)方法測(cè)量所得結(jié)果。通過(guò)EFm’計(jì)算得到的ΦPSII能比傳統(tǒng)“飽和閃光”技術(shù)測(cè)量結(jié)果高15-30%；
（2）將EFm’計(jì)算得到的電子傳遞速率J與凈光合速率AG建立線性方程，其斜率為4.7±0.2，即大約4.7個(gè)電子固定1個(gè)CO2，與理論值相符，文獻(xiàn)請(qǐng)參考LI-COR專(zhuān)家組于2013年發(fā)表于Plant Cell & Environment的文章：“Loriaux S.D., Avenson T.J., Welles J.M., etc. Closing in on maximum yield of chlorophyll fluorescence using a single multiphase flash of sub-saturating intensity. Plant, Cell & Environment, 2013, 36(10) ：1755 ~1770.”。
傳統(tǒng)“飽和閃光”與Multiphase FlashTM多相閃光技術(shù)的設(shè)計(jì)區(qū)別，見(jiàn)下圖：
傳統(tǒng)“飽和閃光”，也叫矩形閃光（RF）測(cè)量方法：打一個(gè)飽和閃光（Q），持續(xù)大約400〜1200 毫秒，期間持續(xù)記錄熒光值，選取最高熒光值為AFm’。
Multiphase FlashTM多相閃光技術(shù)分三階段：（1）先打一個(gè)飽和閃光（Q），持續(xù)時(shí)間大約為300毫秒，用以還原QA-PQ庫(kù);（2）勻速降低Q值大約300毫秒;（3）回到最初的高Q值，保持約300毫秒，檢查閃光引起的非光化學(xué)淬滅（QN）
根據(jù)第二階段獲得的Fm’值與1E4/ Q做回歸分析來(lái)估算光強(qiáng)無(wú)限大時(shí)的最大熒光值。
Multiphase FlashTM多相閃光技術(shù)優(yōu)于傳統(tǒng)“飽和閃光”的其他證據(jù)：
使用Multiphase FlashTM多相閃光技術(shù)，即曲線擬合獲取截距方法（intercept method）估算出最大的、真實(shí)的EFm’，由EFm’計(jì)算得到的電子傳遞速率J和總CO2同化速率之間的效率關(guān)系是真實(shí)的，滿足理論要求的，而使用傳統(tǒng)飽和閃光單一飽和閃光（single pulse method）得到的表觀最大熒光產(chǎn)額AFm’,由AFm’計(jì)算得到的電子傳遞速率和總CO2同化速率之間的關(guān)系是背離理論的，明顯小于4，如下圖所示，左圖為L(zhǎng)oriaux S.D.于2013年發(fā)表于Plant Cell & Environment上的文章所述；右圖為Earl H.于2004年發(fā)表于Photosynthesisi Research上的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。
電子傳遞速率J和CO2總同化速率之間的量化關(guān)系
（理論最大效率：4個(gè)電子固定1個(gè)CO2）
使用Multiphase FlashTM多相閃光技術(shù)得到的EFm’計(jì)算出葉肉導(dǎo)度gm比傳統(tǒng)“飽和閃光”方法得到的AFm’計(jì)算出的葉肉導(dǎo)度gm更真實(shí)合理，見(jiàn)下圖：
