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熒光RT-PCR技術(shù)檢測(cè)H7N9禽流感病毒法問(wèn)世

   2025-07-26 中國(guó)質(zhì)量新聞網(wǎng)792

  4月17日,在北京檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目“禽流感病毒H7N9亞型雙重?zé)晒釸T-PCR定型技術(shù)研究”鑒定會(huì)上,專(zhuān)家組一致認(rèn)為:該項(xiàng)目創(chuàng)新性地實(shí)現(xiàn)了對(duì)禽流感病毒H7N9亞型的一步快速定型,可在一次檢測(cè)中確認(rèn)樣品中是否存在H7N9亞型禽流感病毒或其他H7亞型和N9亞型的禽流感病毒;在通用性、特異性、靈敏性上,技術(shù)優(yōu)勢(shì)突出。專(zhuān)家組同意項(xiàng)目成果通過(guò)鑒定,并建議在進(jìn)一步擴(kuò)大和完善動(dòng)物臨床驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,盡快推廣應(yīng)用。

  目前,在國(guó)內(nèi)通用的確診禽類(lèi)中禽流感病毒H7N9亞型的檢測(cè)技術(shù)中,除采用傳統(tǒng)的雞胚病毒分離方法外,通常采用核酸檢測(cè)方法,如普通PCR方法和基于熒光RT-PCR的“二步法”,但還沒(méi)有建立起采用熒光RT-PCR技術(shù)“一步法”檢測(cè)禽流感病毒H7N9亞型的方法。

  據(jù)該項(xiàng)目組負(fù)責(zé)人、北京局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室博士高志強(qiáng)介紹,項(xiàng)目在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,共建立了3種檢測(cè)方法。最終的禽流感病毒H7N9亞型雙重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)方法是在禽流感病毒H7亞型和N9亞型單重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上通過(guò)優(yōu)化建立,從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)禽流感病毒H7N9亞型的一步快速定型。這種方法不僅能檢測(cè)最近流行的H7N9毒株,還可以用于篩查其他H7亞型毒株。此方法不僅引物特異,而且探針特異,這一“雙特異”性保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性,同時(shí)比普通PCR檢測(cè)技術(shù)要靈敏100~1000倍。

  高志強(qiáng)還指出,本項(xiàng)目在實(shí)施過(guò)程中,制備了H7N9病毒的HA和NA基因全長(zhǎng)的外標(biāo)物質(zhì),具有均勻和穩(wěn)定的特點(diǎn),可在檢測(cè)過(guò)程中對(duì)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增這兩個(gè)重要環(huán)節(jié)進(jìn)行控制,對(duì)規(guī)范診斷檢測(cè)試劑和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制具有重要意義,使不同試劑的檢測(cè)結(jié)果具有了可比性,可用于消除不同人員操作間的差異,解決了目前H7N9檢測(cè)缺乏質(zhì)量控制外標(biāo)物質(zhì)的現(xiàn)狀。

  鑒定會(huì)上,由來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國(guó)科學(xué)院、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院等單位的7名專(zhuān)家組成的鑒定委員會(huì)審查了項(xiàng)目組提交的相關(guān)資料,聽(tīng)取了項(xiàng)目組的匯報(bào),審閱了相關(guān)鑒定資料,最終同意項(xiàng)目成果通過(guò)鑒定。

  北京局自2001年開(kāi)始開(kāi)展熒光RT-PCR檢測(cè)技術(shù)研究,是國(guó)內(nèi)首家將熒光PCR技術(shù)應(yīng)用到檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域和動(dòng)物疫病防控領(lǐng)域的單位,并在實(shí)踐中不斷發(fā)展完善熒光RT-PCR檢測(cè)技術(shù),先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多項(xiàng)熒光RT-PCR檢測(cè)技術(shù),獲得國(guó)內(nèi)首個(gè)動(dòng)物疫病熒光PCR檢測(cè)新藥證書(shū)。

  據(jù)悉,自3月31日國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)通報(bào)上海和安徽發(fā)現(xiàn)3例人感染H7N9禽流感病例后,在國(guó)家質(zhì)檢總局有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)的指導(dǎo)下,該局第一時(shí)間成立了禽流感檢測(cè)技術(shù)研究應(yīng)急專(zhuān)項(xiàng)小組。北京局局長(zhǎng)齊京安號(hào)召:“疫情就是命令,我們要迅速行動(dòng)、全力以赴,為保障人民群眾身體健康作出檢驗(yàn)檢疫部門(mén)的貢獻(xiàn)。”一聲令下,科技人員紛紛行動(dòng)起來(lái):及時(shí)收集、查閱最新流感資料;第一時(shí)間獲得此次H7N9亞型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列;結(jié)合實(shí)驗(yàn)室多年整理保存的禽流感研究資料,重點(diǎn)針對(duì)HA基因和NA基因進(jìn)行序列分析比對(duì)……經(jīng)過(guò)一系列努力,最終找到了變異位點(diǎn),確定了雙重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)技術(shù)研究方案。

  北京局副局長(zhǎng)李忠榜表示,該項(xiàng)目為禽流感病毒H7N9亞型的檢測(cè)提供了快速、高效方法,能夠檢測(cè)到樣品中微量禽流感病毒。該課題鑒定后,課題組還將做大量的驗(yàn)證工作,在實(shí)踐的檢驗(yàn)過(guò)程中不斷完善并制定禽流感病毒H7N9亞型檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),以便將該技術(shù)盡早應(yīng)用到防控工作中,為確保活禽和禽產(chǎn)品的進(jìn)出口安全,為國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖企業(yè)禽流感疫情普查,為老百姓吃上放心禽產(chǎn)品提供服務(wù)。同時(shí),該局會(huì)盡快將研究成果應(yīng)用到檢驗(yàn)檢疫工作中,接受實(shí)踐檢驗(yàn),為提高口岸一線的檢測(cè)能力做好技術(shù)儲(chǔ)備和技術(shù)支持工作。

 

 
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