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中藥制劑中大黃素和大黃酸的分離液相色譜法

   2025-07-12 現(xiàn)代實(shí)驗室裝備網(wǎng)620
  1儀器和試劑

  LC-10T高效相色譜儀,VI2010S色譜數(shù)據(jù)處理軟件。甲醇(色譜純),水為重蒸餾水,其它試劑為分析純。大黃酸對照品(供含量測定用,批號0757-9804)由中國藥品生物制品檢定所提供。樣品常通口服液為南方醫(yī)院藥學(xué)部試制。

  2色譜條件

  VertexC18液相色譜柱(150×4.6mm,5μm),流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液85:15,檢測波長為254nm,流速為1ml·min-1。溫度:室溫20℃。在此條件下,大黃酸的保留時間約12min,與其它峰分開。大黃酸對照品、常通口服液的高效液相色譜圖見圖1、2。圖1大黃酸標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖圖2常通口服液HPLC色譜圖

  3線性關(guān)系考察

  精密稱取大黃酸對照品0.00402g,置100ml量瓶中,加甲醇至刻度,制得對

  照品儲備液,取儲備液適量,加流動相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的對照品系列溶液,各依法進(jìn)樣20μl,按上述色譜條件進(jìn)行測定。以大黃酸對照品濃度X為縱坐標(biāo),峰面積Y(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為:Y=9.534×10-6X 0.1934,相關(guān)系數(shù)r=1.0000。說明進(jìn)樣量在0.0402-0.804μg范圍內(nèi),對照品濃度與峰面積呈線性關(guān)系。

  3對照品溶液與供試品溶液的制備

  對照品溶液的制備:精密移取大黃酸對照品儲備液適量,加流動相稀釋為濃度為8.04μg/ml對照品溶液。

  供試品溶液的制備:精密移取常通口服液10ml,加入1ml0.8%的磷酸溶液,加入甲醇定容至20ml,搖勻,離心10min,取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,即為供試品溶液。

  空白溶液的制備:取除大黃的藥味按同一工藝制成的缺大黃空白樣品0.2ml,按供試品溶液制備方法操作,即得。

  4精密度實(shí)驗

  精密吸取8.04μg/ml的對照品溶液10μl,注入高效液相色譜儀,連續(xù)測定5次,大黃酸的平均峰面積為831543,RSD=0.18%(n=5)。表明結(jié)果精密度良好。

  5穩(wěn)定性試驗

  精密吸取室溫保存的同一對照品溶液10μl,同法每間隔一定時間進(jìn)樣測定,共5次,結(jié)果表明供試品溶液在7天內(nèi)無明顯變化,表明此對照品基本穩(wěn)定,RSD=0.49%.

  6重復(fù)性試驗

  取同一批常通口服液6份各10ml,依法測定,結(jié)果大黃酸含量的平均值為165.62,RSD=2.15%(n=6)。說明方法重復(fù)性較好.

 
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