近期，可口可樂公司在橙汁中發現未經許可的殺菌劑，并向美國食品與藥物管理局(FDA)報告。此次檢出殺菌劑多菌靈的橙汁，原料橙來自巴西，當地多菌靈多用于殺滅霉菌，但實驗時發現，該物質有導致動物肝癌病變的高風險。這一事件引發了外界對中國橙汁飲料食品安全的擔憂。中國是巴西橙汁第四大進口國，據悉，中國市場現售的熟知品牌橙汁，不同程度地兌入了巴西橙汁。
目前，國內對于果汁中多菌靈的檢測主要依據SN/T 1753-2006《進出口濃縮果汁中噻菌靈、多菌靈殘留檢測方法高效液相色譜法》，賽分科技日前建立了采用QuEChERS和LC/MS/MS檢測橙汁中多菌靈的方法，不僅操作上更加快速簡單，而且大大提高了目標物質的檢出限（多菌靈檢測限達到ppb級）。
采用QuEChERS和LC/MS/MS方法檢測橙汁中的多菌靈
產品描述
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ECQUEU750CT-MP |
50 mL離心管，每袋包含4 g MgSO4，1g NaCl，500 mg 檸檬酸二鈉和1 g 檸檬酸三鈉 |
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CUMPSC18CT |
2mL微離心管裝有150 mg無水硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg封尾C18 |
一、樣品前處理
1. 向50mL離心管中加入10 mL橙汁，渦流混均、平衡15 min。
2．加入10 mL乙腈混合。加入鹽包 (ECQUEU750CT-MP)，劇烈振蕩1min，然后在20 ºC，5000 rpm轉速下離心5 min。下面是經過QuEChERS提取后的樣品圖片，上層是乙腈提取液。
3．移取1 mL提取液至裝有150 mg無水硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg封尾C18的2 mL微離心管中（CUMPSC18CT）
4. 振搖1 min后在10000 rpm轉速下離心5 min。移取 0.5 mL提取液至2 mL自動進樣瓶。加入25 μL 1 ppm 三苯基磷酸酯（TPP），然后進行LC/MS/MS分析。
二、液相色譜-串聯質譜條件
色譜柱: Sepax HP-C18, 2.1 x 100 mm, 3 μm, 120 Å
柱溫: 室溫
進樣體積: 10 μL (15 ºC)
流動相: A: 0.1% 甲酸溶液；B:含 0.1% 甲酸的甲醇溶液
流速: 200 μL/min
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流動相梯度程序 | ||
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時間(min) |
%A |
%B |
|
0 |
50 |
50 |
|
3 |
0 |
100 |
|
8 |
0 |
100 |
|
9 |
50 |
50 |
|
14 |
50 |
0 |
電離模式: 電噴霧離子源（ESI）
離子極化方式：正離子 ESI
電噴霧電壓: 3000 V
霧化氣壓力 (N2): 40 psi
輔助氣(N2)壓力: 10 psi
離子傳輸毛細管溫度: 350 °C
掃描方式: 選擇反應監測（SRM, 0-10 min)
碰撞誘導裂解（CID）條件: 1.5 mTorr 氬氣
SRM模式下監測的躍遷過程如下：
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化合物 |
母離子 |
子離子1 |
碰撞能量(CE) |
子離子2 |
碰撞能量(CE) |
S-Lens |
駐留時間（s） |
|
多菌靈 |
92.093 |
132.080 |
29 |
160.080 |
17 |
81 |
0.2 |
|
TPP（內標） |
327.093 |
77.020 |
37 |
152.070 |
33 |
98 |
0.10 |
三、數據分析及實驗結果
多菌靈的基質匹配校準曲線：
線性范圍是2-500 ng/mL，R2 =0.9992。檢出限（LOD）和定量限(LOQ)分別是0.4 和1.4 ng/mL。
多菌靈的準確度和精密度數據
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加標濃度（ng/mL） |
回收率（%） |
RSD%(n=4) |
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10 |
96.6 |
4.5 |
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50 |
100.2 |
3.4 |
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250 |
103.7 |
2.1 |
按照優化的方法，對三家知名品牌的橙汁進行了檢測，結果見下表：
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樣品 |
樣品描述 |
檢測到的多菌靈含量 |
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樣品1 |
100% 鮮橙汁-品牌A |
< 1.4 ng/mL |
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樣品2 |
橙汁-品牌B |
< 1.4 ng/mL |
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樣品3 |
含果粒的橙汁-品牌B |
5.3 ng/mL |
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樣品4 |
純果樂（低酸）-品牌C |
< 1.4 ng/mL |
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樣品5 |
橙汁-品牌B |
< 1.4 ng/mL |
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樣品6 |
純果樂（含一些果粒）-品牌C |
< 1.4 ng/mL |
這六種橙汁樣品每種平行測定3次。僅在樣品3（含果粒的橙汁-品牌B）中檢出多菌靈，含量為5.3 ng/mL，遠遠低于歐盟規定的最大允許量 200 ppb。圖1為空白樣品3（a）和加標樣品3 (50 ng/mL)中多菌靈的色譜圖。
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